Video Overlay Titlle
Video Overlay description
Bir sağlık profesyoneli misiniz?
Bu site yalnızca gastrik ve/veya gastroözofageal bileşke kanserlerinin yönetimi ile ilgilenen sağlık profesyonelleri için hazırlanmıştır.
SAĞLIK PROFESYONELİ DEĞİLİM, ANCAK GASTRİK/GASTROÖZOFAGEAL BİLEŞKE KANSERLERİ HAKKINDA DAHA FAZLA BİLGİ ALMAK İSTİYORUM
G/GEJ tümör numunelerinde CLDN18.2'yi saptamak için neden CLDN18 antikorları kullanılmalıdır?
CLDN18 antikorları aracılığıyla, CLDN18.1 ve CLDN18.2 olmak üzere her iki CLDN18 izoformu da tanımlanabilir. Ancak G/GEJ tümör dokusu değerlendirilirken, boyanma CLDN18.2 varlığına bağlanabilir çünkü2,3:
- CLDN18.1 öncelikle akciğer adenokarsinomu dokusunda eksprese edilir ve G/GEJ kanserlerinde ekspresyonu ihmal edilebilir düzeydedir veya yoktur3
- CLDN18.2 normalde gastrik epitelde bulunur ve genellikle malign gastrik dokuda korunur3
Numune hazırlama ve preanalitik
Biyobelirteç sonuçlarının doğruluğunu sağlamak için uygun numune işleme ve hazırlama esastır.1
CLDN18.2 Numuneleri Test için Nasıl Hazırlanır
Dr. Takeshi Kuwata, PhD
Numune hazırlanması
Kılavuzlar, üretici tavsiyelerine göre günlük doku işlemcisi bakımını ve formalin pH/saflığı ve alkollerin su kontaminasyonu dahil olmak üzere işlemci sıvılarına yönelik titiz kalite bakımını önermektedir.1
Soğuk iskemi süresi
Mevcut kılavuzlara göre soğuk iskemi süresi <60 dakika ile sınırlandırılmalıdır.1
Fiksasyon
Kılavuzlar, numune fiksasyonunun boyutları ve süresi ile ilgili tavsiyeler vermektedir.1
Temel özellikler1
Doku tamamen fiksatif içine batırılmış olmalıdır
Fiksatif hacminin doku kütlesine oranının 4:1'den az olmamasına ve optimum oranın 10:1 olmasına dikkat edilmelidir
Parafin <60°C'de eritilmelidir
Analiz için yeterli tümör dokusu içeren numune
Temel süreler1
Stabilizasyon kapsamında, doku %10 nötr fosfat tamponlu formalin (pH 7,0) içinde en az 6 saat ve en fazla 24 ila 36 saat süreyle fikse edilmelidir.
Doku yüksek yağ içeriğine sahipse, fiksasyon 48 saate kadar sürebilir
Suboptimal doku fiksasyonu1
Doğru skorlamayı engelleyebilecek boyanma artefaktlarını en aza indirmek için preanalitik değişkenler optimize edilmelidir.
Suboptimal fiksasyon nedeniyle sitoplazma kaynaklı renk değişikliği, doğru membranöz skorlamayı etkileyebilir.
Suboptimal fiksasyona bağlı sitoplazmik kızarma, doğru membranöz skorlamayı engelleyebilir.
Numune hazırlama2
Rutin olarak işlenmiş, formalinle fikse edilmiş, parafine gömülmüş (FFPE) dokular, IHC testiyle kullanım için uygundur
İnce iğne aspiratı (FNA), sitoloji numuneleri veya metastatik kemik lezyonu olan numuneler CLDN18 boyaması için uygun değildir
Doku kesitleri 3 µm-6 µm* boyutlarında kesilebilir
Boyamadan önce, kesit lamları ya oda sıcaklığında (havada kurutulmuş)
ya da 60°C'de 60 dakika boyunca çevrimdışı fırınlama (fırında pişirilmiş) yoluyla tamamen kurutulmalıdır*
*CLDN18'e özel.
Saklama koşulları1
Numunelerin bütünlüğünü sağlamak için saklama alanları aşağıdaki gibi olmalıdır:
Kuru
Haşeresiz
Oda sıcaklığı (18°C ila 25°C)
Testler
CLDN18.2 IHC ekspresyonunu değerlendirmek için seçenekler
CLDN18.2 ekspresyonunun değerlendirilmesi için bir dizi test, antikor ve platform mevcuttur. Testler ve antikorlar arasında VENTANA CLDN18 (43-14A) IVD Testi, LSBio PathPlus™ CLDN18 Antikoru ve Abcam Rekombinant Anti-Klaudin 18 antikoru (43-14A) bulunmaktadır. Platform seçenekleri arasında BenchMark ULTRA, Dako Autostainer ve Leica Bond bulunmaktadır.4
Antikorlar/testler ve platformların listesi kapsamlı değildir. Lütfen klinik karar verme sürecini yönlendirmek için uygun testi kullanın.
VENTANA CLDN18 (43-14A) IVD testiDaha Fazla Bilgi
LSBio PathPlusTM CLDN18 AntikoruDaha Fazla Bilgi
Abcam Rekombinant AntiKlaudin 18 antikoru (43-14A)Daha Fazla Bilgi
CLDN18.2 Testi Nasıl Yapılır
Dr. Christoph Rocken
Uygun kontrolleri seçin
G/GEJ tümör numunelerinde CLDN18.2'nin saptanması için uygun kontroller gereklidir. Bunların seçimi ve kullanımına ilişkin bazı temel noktalara değinelim.2,5
Validasyon kontrolleri
Kılavuzlar, laboratuvarların immünohistokimyasal testleri klinik hizmete sunmadan önce valide etmesini ve/veya doğrulamasını ve testin kullanım amacını yansıtacak şekilde pozitif, negatif ve sınırda doku şeklinde olmasını önermektedir.5
Doku kontrolleri çeşitli sağlayıcılar tarafından piyasada satılmaktadır:
Çalışma kontrolleri
- Pozitifler ve negatifler dahil olacak şekilde optimum çalışma kontrollerinin kullanılması tavsiye edilir2
- Gastrik intestinal metaplazi dokusu, aşağıdakileri gösterdiği için uygun bir pozitif ve negatif kontrol örneğidir2:
- Normal gastrik epitel hücrelerinde güçlü membranöz boyanma
- Metaplazi alanlarında epitel hücrelerinin zayıf-orta derecede membranöz boyanması
- Lamina propria, lenfositler, düz kas, kan damarları ve periferik sinirde boyanmanın olmaması
- Pozitif kontroller boyanma göstermezse, test numunesinin sonuçları geçersiz kabul edilmelidir2
- Bilinen pozitif doku kontrolleri, test numunelerinin spesifik tanısını belirlemede yardımcı olarak değil, yalnızca reaktiflerin ve cihazların performansını izlemek için kullanılmalıdır2
CAP PPMPT, Amerikan Patologlar Koleji Hassas Tıp için Preanalitik Proje Ekibi; CLDN, klaudin; CLDN18.1, klaudin 18 izoform 1; CLDN18.2, klaudin 18 izoform 2; FDA, ABD Gıda ve İlaç İdaresi; G/GEJ, gastrik/gastroözofageal bileşke; IHC, immünohistokimya; IVD, in vitro tanı.
Platformlar ve antikor performans özellikleri
Üç CLDN18 antikorunun ve IHC boyama platformlarının 27 global laboratuvardan oluşan bir kohortta tekrarlanabilirliğini ve karşılaştırılabilirliğini değerlendiren bir çalışmada4,*,†:
- VENTANA CLDN18 (43-14A) IVD Testinin analitik performansı (doğruluk, duyarlılık ve özgüllük) >%95'tir ve 27 laboratuvarda konsensüs referans sonuçlarına kıyasla tekrarlanabilirdir4
- Analitik performans, Dako veya Leica platformunda boyandığında LSBio antikoru için VENTANA (43-14A) IVD Testine eşdeğerdir4
- LSBio antikoru için boyama tekrarlanabilir olmuştur4
*Çalışmadaki antikorlar, Roche Tissue Diagnostics'in VENTANA CLDN18 (43-14A) IVD Testi, LSBio'nun PathPlus™ CLDN18 Antikoru ve Novus Biologicals'in Klaudin-18 Antikorundan oluşmuştur. Platformlar BenchMark ULTRA, Dako Autostainer ve Leica Bond’dan oluşmaktadır4
†Her numune için tüm antikorlardan elde edilen konsensüs referans skorları merkezi patoloji incelemesi ile belirlenmiştir. CLDN18.2 pozitifliği, orta-kuvvetli (>2+) boyanma yoğunluğu olan membranöz CLDN18 eksprese eden tümör hücrelerinin >%75'i şeklindeki bir eşik değerle tanımlanmıştır. Buna göre, katılan patologlardan ikili bir pozitif/negatif kararı ve boyanan hücrelerin yüzdesine ilişkin bir tahmin sunmaları istenmiştir. Laboratuvar tarafından gönderilen IHC skorları referans konsensüs skoru ile karşılaştırılmış ve pozitif/negatif ikili sonuç farklıysa uyumsuz olarak değerlendirilmiştir. Karşılaştırma için istatistiksel analiz yapılmış ve %85 (>0,85) kabul kriteri uygulanmıştır
Refleksif testler hasta sonuçlarını iyileştirebilir6
Biyobelirteç testinin geciktirilmesi klinik sonuçları kötüleştirebilir6
Kılavuzlar, metastatik gastrik kanser belgelenmişse veya şüphesi varsa, tanı anında HER2 gibi mevcut, işlem yapılabilir tüm biyobelirteçler açısından test yapılmasını önermektedir.6
ESMO kılavuzları CLDN18.2 açısından test yapılmasını önermektedir.6
Herhangi bir yeni biyobelirteç, sonuçların zamanında raporlanmasını sağlamak için diğer biyobelirteçlerle eş zamanlı olarak test edilmelidir.6,7
Refleksif test, hedefe yönelik tedavinin daha erken başlamasını sağlayarak klinik sonuçları iyileştirir7
Farklı kanser türlerini içeren ileri evre kanser hastalarından oluşan bir kohortta (N=1423), tanı anında bir refleks test protokolünün uygulanması, genel sağkalımda iyileşme ile ilişkilendirilmiştir.7
OS 12. ayda
Refleksif testlerin hasta sonuçlarını iyileştirdiğine dair kanıtlar gördük. Patologların tüm yaygın, işlem yapılabilir biyobelirteçler açısından tanı sırasında test yapılmasını savunması kritik önem taşımaktadır.
Dr. Matteo Fassan, PhD
Referanslar: 1. Compton CC, Robb JA, Anderson MW, et al. Preanalytics and precision pathology: pathology practices to ensure molecular integrity of cancer patient biospecimens for precision medicine. Arch Pathol Lab Med 2019;143(11):1346-63. 2. Ventana CLDN18 (43-14A) assay [Kullanma Kılavuzu]. Roche Diagnostics Turkey A.Ş. 3. Sahin U, Koslowski M, Dhaene K, et al. Claudin-18 splice variant 2 is a pan-cancer target suitable for therapeutic antibody development. Clin Cancer Res 2008;14(23):7624-34. 4. Jasani B, Schildhaus HU, Taniere P, et al. Global ring study determining reproducibility and comparability of CLDN18 testing assays in gastric cancer. Poster presented at: ESMO Targeted Anticancer Therapies Congress; March 6-8, 2023; Paris, France. 5. College of American Pathologists. IHC assays-New evidence-based guideline for analytic validation (04-01-2004). https://documents.cap.org/documents/ihc-validation-webinar-handout.pdf. Accessed 03-30-2023. 6. ESMO Gastric Cancer Living Guidelines (07- 2023). https://www.esmo.org/living-guidelines/esmo-gastric-cancer-living-guideline/diagnosis-pathology-and-molecular-biology/article/diagnosis- pathology-and-molecular-biology. Accessed 09-07-2023. 7. Piening B, Bapat B, Weerasinghe RK, et al. Improved outcomes from reflex comprehensive genomic profiling-guided precision therapeutic selection across a major US healthcare system [Abstract 6622]. J Clin Oncol 2023;41(Suppl 16).